Los polifenoles vegetales con una estructura de catecol pueden formar aductos covalentes con proteínas de carne, lo que afecta la calidad y el procesamiento de los productos cárnicos. Sin embargo, existe una falta de métodos rápidos y efectivos para caracterizar estos aductos y comprender sus mecanismos. Este estudio tuvo como objetivo investigar la interacción covalente entre la proteína miofibrilar (MP) y el ácido cafeico (CA), un polifenol vegetal con una estructura de catecol, utilizando tecnología de sonda molecular. Los aductos CA-MP se separaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y se detectaron mediante análisis de Western blot y LC-MS/MS. El análisis de Western blot reveló que varios aductos específicos se enriquecieron e identificaron con éxito como bandas alrededor de 220 kDa, 45 kDa y dos bandas distintas entre 95 y 130 kDa. Combinado con el análisis de LC-MS/MS, se identificaron un total de 51 péptidos como aductos de CA, correspondientes a 31 proteínas. Más del 80% de los péptidos aductados llevaban un sitio aductado, y el resto llevaba dos sitios aductados. Los sitios aductados se encontraban en cisteína (C/Cys), histidina (H/His), arginina (R/Arg), lisina (K/Lys), prolina (P/Pro) y residuos N-terminales (N-Term). Los resultados mostraron que la interacción covalente de CA y MP era altamente selectiva para la cadena lateral R de los aminoácidos. Además, los aductos tenían más probabilidades de formarse a través de enlaces C-N que de enlaces C-S. Este estudio proporciona nuevas ideas sobre la interacción covalente de polifenoles vegetales y proteínas de carne, lo que tiene importantes implicaciones para el uso racional de polifenoles vegetales en la industria cárnica.