Ensayo de interacción de ADN/proteína in situ para visualizar la activación del factor de transcripción
Autores: Corsini, Michela; Moroni, Emanuela; Ravelli, Cosetta; Grillo, Elisabetta; Presta, Marco; Mitola, Stefania
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2020
Disponible con Suscripción Virtualpro
Artículos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
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Consultas: 4
Citaciones: Sin citaciones
El embrión de pollo de la membrana corioalantoidea (CAM) representa un poderoso modelo in vivo para estudiar varios procesos fisiológicos y patológicos, incluida la inflamación y la progresión tumoral. Sin embargo, la posibilidad de profundizar en los procesos moleculares en el sistema CAM se ve sesgada por la ausencia/escasez de reactivos químicos y biológicos diseñados específicamente para especies aviares. Esto es particularmente cierto para los factores de transcripción, moléculas proteicas que regulan diversas respuestas celulares, incluida la proliferación, supervivencia y diferenciación. Aquí proponemos un protocolo detallado e independiente de anticuerpos para visualizar la activación y la translocación nuclear de factores de transcripción en células o tejidos de diferentes especies animales. Como prueba de concepto, se caracterizó la interacción ADN/proteína del factor de unión al elemento de respuesta de ADN/cAMP (CREB) en el tejido CAM utilizando oligonucleótidos que contenían la secuencia de unión palindrómica de CREB. Se utilizaron oligonucleótidos aleatorizados como controles. El protocolo de interacción ADN/proteína in situ es un método versátil que es útil para el estudio de factores de transcripción en células y tejidos de diferentes orígenes.
Descripción
El embrión de pollo de la membrana corioalantoidea (CAM) representa un poderoso modelo in vivo para estudiar varios procesos fisiológicos y patológicos, incluida la inflamación y la progresión tumoral. Sin embargo, la posibilidad de profundizar en los procesos moleculares en el sistema CAM se ve sesgada por la ausencia/escasez de reactivos químicos y biológicos diseñados específicamente para especies aviares. Esto es particularmente cierto para los factores de transcripción, moléculas proteicas que regulan diversas respuestas celulares, incluida la proliferación, supervivencia y diferenciación. Aquí proponemos un protocolo detallado e independiente de anticuerpos para visualizar la activación y la translocación nuclear de factores de transcripción en células o tejidos de diferentes especies animales. Como prueba de concepto, se caracterizó la interacción ADN/proteína del factor de unión al elemento de respuesta de ADN/cAMP (CREB) en el tejido CAM utilizando oligonucleótidos que contenían la secuencia de unión palindrómica de CREB. Se utilizaron oligonucleótidos aleatorizados como controles. El protocolo de interacción ADN/proteína in situ es un método versátil que es útil para el estudio de factores de transcripción en células y tejidos de diferentes orígenes.