El ARN de interferencia (ARNi) es una poderosa herramienta para estudiar la función génica debido a la facilidad con la que puede silenciar selectivamente genes de interés, y también ha atraído la atención por su potencial para aplicaciones terapéuticas. Los ARN de interferencia de pequeño tamaño (siARN) sintetizados químicamente y los ARN de horquilla corta (ARNhc) basados en vectores de ADN se utilizan ahora ampliamente como activadores del ARNi. A diferencia de los ARNhc expresados, el uso de ARNhc sintéticos es limitado. En este trabajo diseñamos ARNhc basados en un microARN precursor (pre-ARNmi) y evaluamos su actividad biológica. Demostramos que los ARNhc basados en pre-miARN químicamente sintéticos tienen una actividad de ARNi más potente que sus correspondientes siARN y descubrimos que sus cadenas antisentido se incorporan de forma más eficiente al complejo de silenciamiento inducido por ARN. Aunque los ARNhc indujeron mayores efectos fuera de diana y respuestas al interferón que sus correspondientes siARN, estos efectos podrían superarse simplemente utilizando una concentración menor u optimizando y modificando químicamente los ARNhc de forma similar a los siARN sintéticos. Estos son retos para el futuro.