La constante intensificación de la acuicultura ha aumentado considerablemente los niveles de estrés de los peces de piscifactoría y, en consecuencia, el número y la intensidad de los brotes de enfermedades. Por ello, los estudios sobre la respuesta inmunitaria de los peces, especialmente en lo que se refiere a la interacción de sus leucocitos con posibles patógenos y xenobióticos, son de gran importancia para desarrollar nuevas estrategias profilácticas y curativas. Aislamos leucocitos del riñón cefálico de Astyanax lacustris -una importante especie de pez neotropical para la acuicultura y un modelo potencial para la investigación en acuicultura neotropical- utilizando un protocolo de centrifugación Percoll. Los leucocitos aislados se incubaron con lipopolisacárido (LPS) y se midió la expresión de los genes IL-1β, IL-8, LysC y LysG. Se evaluó la actividad fagocítica de los leucocitos utilizando levadura teñida con rojo Congo, un protocolo novedoso y rentable que se ha desarrollado en este estudio. Los leucocitos aislados respondieron a la inducción de LPS, mostrando una fuerte regulación al alza de IL-1β e IL-8, dos de las interleucinas proinflamatorias más importantes para la respuesta inmunitaria de los vertebrados. La concentración óptima de levaduras para el ensayo fagocítico fue de 106 células mL-1, resultando en una capacidad fagocítica (PC) aceptable pero sin exceso de levaduras durante el proceso de recuento, asegurando una alta precisión y exactitud del método. Hasta donde sabemos, el presente estudio es el primero en investigar la expresión génica y la actividad fagocítica in vitro de leucocitos aislados de A. lacustris. Nuestros hallazgos servirán de referencia para futuros estudios sobre la inmunología y toxicología de peces neotropicales.